شذى حسن بشر*(1)
((1). الهيئة العامة للتقانة الحيوية، دمشق، سورية.
(*للمراسلة: د. شذى حسن بشر. البريد الإلكتروني: sh.hasan85@gmail.com).
تاريخ الاستلام: 30/01/2020 تاريخ القبول: 04/04/2020
الملخص
نفذ هذا البحث في مخابر الهيئة العامة للتقانة الحيوية خلال الفترة 2018-2019 بهدف تحديد استجابة كالوس نبات البنج الذهبي (Hyoscyaamus aureus) ودراسة ديناميكية نموه على أوساط مغذية مختلفة التركيب وخالية من منظمات النمو النباتية، بالاعتماد على الوزن الرطب للكتلة الخلوية كمؤشر على قوة نمو الكالوس، بالإضافة إلى تأثير مكونات الوسط المغذي وتغير تعبير المورثتين المرمزتين لأنزيمي (TR I) Tropinon Reductase I و (TR II) Tropinon Reductase II في إنتاج قلويدات الهيوسيامين والسكوبولامين من مزارع الكالوس لنبات البنج الذهبي (H. aureus)، وذلك عن طريق تقدير مستويات التراكم النسخي لـ mRNA الخاص بهاتين المورثتين باستخدام تقنية تفاعل بوليمراز التسلسلي في الوقت الحقيقي Real Time PCR . بيّنت نتائج الدراسة أن منحنى النمو لخلايا الكالوس اتخذ شكل المنحنى السيني Sigmoid في جميع الأوساط المختبرة، حيث بلغت سرعة نمو الخلايا أقصى معدّلاتها في الطور الأسي Exponential Phase (من اليوم 15 حتى اليوم 35) في جميع الأوساط، مع تفوق الشاهد (5C01) في وزن الكتلة الخلوية، كما تفوقت معاملة الشاهد 5C01 بمحتواها من قلويدات التروبان (الهيوسيامين والسكوبولامين) في الأوساط 5C و 6C و 10C، حيث بلغ تركيز القلويدات أقصى ما يمكن في الطور الأسي (بعمر 30 يوم) وقدرت بـ (0.49%) و (0.36 %) و (0.29 %) و (0.21 %) في الخطوط الخلوية 5C01 و 5C و6C و 10C على التوالي بالنسبة للهيوسيامين، بينما كان تركيز السكوبولامين ضئيلاً بالمقارنة مع الهيوسيامين. كذلك شهدت مرحلة الطور الأسي أعلى قيمة لتعبير المورثة المرمزة لأنزيم TR I، حيث بلغت (9.781) و (2.144) و (8.168) ضعف أكبر بالمقارنة مع الشاهد 5C01 في كل من الخطوط الخلوية 5C، 6C ، 10C على التوالي وبفروقات معنوية فيما بينها، في حين كانت أعلى قيمة لتعبير مورثة TR II في الطور المتلكئ (بعمر 5 أيام)، لكن هذا التفوق في التعبير المورثي لم يترافق مع زيادة في تركيز القلويدات المنتجة، نتيجة عدم مقدرة أنزيم TR I المكون للـتروبين على المنافسة في تدفق الكربون من الكالستيجين باتجاه تخليق مركب التروبين، في حين يحرض أنزيم TR II تشكل البسيدوتروبين مما يزيد من تراكم الكاليستيجين وليس قلويدات التروبان.
الكلمات المفتاحية: البنج الذهبي، تفاعل بوليمراز التسلسلي في الوقت الحقيقي، TR I، TR II،
هيوسيامين، سكوبولامين، مزارع الكالوس.
البحث كاملاً باللغة العربية: pdf